一、簡介

蛋白質(zhì)的測定方法，目前仍以1883年凱達爾氏(Kiedahl)發(fā)明的定氮法為基礎(chǔ)，它根據(jù)各種蛋白質(zhì)都具有固定比數(shù)的氮這一事實，通過對氮的測定而推算出蛋白質(zhì)含量，此法所得的含氮量除了確定屬于蛋白質(zhì)組成成分的氮以外，還包括非蛋白質(zhì)組成的其他有機及無機態(tài)氮，所以換算所得的蛋白質(zhì)含量稱作為粗蛋白含量，一般蛋白質(zhì)中的含量為18%，換算后即每6.25克蛋白質(zhì)中含有1克氮，因此6.25成為換算系數(shù)K，但是不同的農(nóng)產(chǎn)品及其制品的實際含氮量有區(qū)別，所以不同農(nóng)產(chǎn)品必須采用不同的換算系數(shù)，如花生、大豆、蠶豆、大麥、小麥、燕麥、黑麥等含氮為17.6%，求得K=5.7，蕎麥、葵花籽、亞麻籽、麻籽、棉花籽、蓖麻籽等換算系數(shù)則為K=5.50，玉米、菜籽為6.00，水稻為5.95，上述以外的其他農(nóng)產(chǎn)品的換算系數(shù)均適用6.25。盡管如此，目前世界上還沒有直接分離測定含蛋白質(zhì)的可行方法。因此，迄今為止在國內(nèi)外凱氏定氮法仍然是測定蛋白質(zhì)含量的經(jīng)典方法。所得結(jié)果準確、穩(wěn)定。

上海密通儀器有限公司生產(chǎn)的全自動定氮儀（蛋白質(zhì)測定儀），是引進消化吸收國內(nèi)外檢測新技術(shù)，結(jié)合我國國情，應(yīng)用凱氏定氮法原理，采用化學(xué)與物理學(xué)相結(jié)合完成的成套蛋白質(zhì)含量快速測定裝置。為糧食、食品、飼料、農(nóng)業(yè)、商檢等檢測部門提供了理想的檢測設(shè)備。

二、操作方法  上海密通儀器有限公司廠家直供

1.試劑制備

     A.硫酸(比重1.84)

B.NaOH溶液:400g NaOH 溶于1000mlH2O中

C.2%H3BO3

     D.0.1NHCL

E. 催化劑:硒+無水硫酸鈉(1:1000)或硫酸銅等

F.指示劑:0.1%甲基紅+0.5%溴甲酚綠(1:1)

2.樣品消化

  稱取經(jīng)粉碎通過40-60目/寸樣0.5-1克(視含氮量而定)無損地置入已洗滌烘干的消化管中加催化劑5克左右和10ml左右硫酸。 將消化管分別放入消化架各個孔內(nèi)，然后置于消化爐上，然后開啟抽氣三通上自來水龍頭，使抽氣三通處于吸氣狀態(tài)，接通電源，在加熱初始階段防止樣品飛濺。（選用電壓型控溫的消化爐起先控制在150伏左右，15分鐘左右后可滿電壓工作），（選用數(shù)顯型消化爐起先控制在200度左右，20分鐘左右后再設(shè)定所需溫度）。

3．蒸餾（結(jié)構(gòu)圖上有Δ標記工作必需做）

     （ST-O4A為例）蒸餾器中，堿液及蒸餾水采用電磁泵加入，機器側(cè)面標簽NaOH、H2O注入接口用橡膠管套入后分別置入自備的容器中，加液時按面板上相應(yīng)開關(guān)，液體由泵吸入消化管內(nèi)，注入毫升數(shù)視標尺所注位置而定。（一般堿液加量是消化時硫酸用量5倍以上，加蒸餾水量15毫升左右）

1．打開電源，打開自來水龍頭，接冷卻水自來水龍頭不必開過大，出水口有水流出即可，用排水管子上夾子夾緊排水管子。

開面板上右邊蒸氣開關(guān)手柄往上推為開蒸氣，同時把左邊進水開關(guān)手柄往上推為開，待電流表指針指在1A—2A時如果水進入側(cè)面蒸發(fā)爐慢，電流表長時間沒反應(yīng)，請用吸合球往正面的細長管內(nèi)吹幾下以排除管內(nèi)空氣，看示意圖指示馬上關(guān)把左邊進水開關(guān)手柄往下壓，壓到底壓不下為關(guān)（盡量不要關(guān)太慢，防止電流過大而燒壞15A保險絲），待蒸氣管噴出氣后又上推打開左進水開關(guān)供水，2分鐘左右后電流穩(wěn)定在3.5A-6A左右后，關(guān)閉右蒸氣開關(guān)手柄往下壓到底，壓不下為關(guān)。因為紅色進水開關(guān)是控制機器內(nèi)部產(chǎn)生蒸氣的水源開關(guān)，從側(cè)面的有機玻璃窗口內(nèi)可以看到蒸發(fā)爐水位的高低，防止水位過高，因為一開始水沒有沸騰，水不斷進入，容易使電流過大而燒壞保險絲。蒸氣開關(guān)是起通斷蒸氣作用，也是水源進入蒸發(fā)爐和排除蒸發(fā)爐水（實驗結(jié)束時）的排水器件。（如果蒸氣出來后電流不大請開關(guān)一下紅色蒸氣開關(guān)會正常。（上推為開，下壓為關(guān)））

2．在250mL三角接收瓶中加入50mL2%H3BO3和2-3滴混合指示劑，蒸餾時間設(shè)定6-8分鐘，并使接收瓶托架盤往上移，使滴管浸沒在液體中，然后按時控開關(guān)（也可不用開）。

3．向上扳動側(cè)面紅球手柄把消化管固定在左邊托架上，然后按面板上開關(guān)分別加入H2O、NaOH 液體，然后上推蒸氣開關(guān)，向試管內(nèi)注入蒸氣，進行蒸餾樣品，在接收瓶內(nèi)接收液達150mL左右時移下接收瓶，用蒸餾水沖洗滴管口繼續(xù)蒸餾半分鐘，然后取下接收瓶，待滴定用，關(guān)蒸氣開關(guān)。第二個樣品只要放上后，加好液，上推蒸氣開關(guān)既可，不要關(guān)電源。

4．滴定.

用0.1NHCL滴定接收瓶內(nèi)的溶液，滴定溶液由綠色變成淡紫色時為止，記下消耗HCL的毫升數(shù)，按下列式子計算蛋白含量：

蛋白含量（%）=（V-V0）N  0.014  A  100

                 ————————————

                           W

式中：V----消耗HCL的毫升數(shù)

             V0-----空白實驗時消耗HCL的毫升數(shù)

             N----- HCL的當(dāng)量濃度

             0.014----1ml HCL的克當(dāng)量數(shù)

             A---固定系數(shù)（6.25、5.7、5.3等）

             W----試樣重量g （空白測定：用0.1克糖代替樣品或不加樣品作空白測定）

4、關(guān)機

關(guān)電源、關(guān)水龍頭、打開排水夾子，兩紅球開光上推，取下消化管，擦干凈機器。